动物实验-抗氧化功能评价方法

1 动物试验项目

1.1 老年动物

选取10个月以上的大鼠或8个月以上的小鼠，根据血液中MDA水平分组，随机分为1个溶剂对照组和3个供试品剂量组。三个剂量组给予不同浓度的试验样品，对照组给予相同体积的溶剂，1次/d，连续30天。实验结束时处死动物，测定脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原型谷胱甘肽含量、抗氧化酶活性。

1.2 D-半乳糖氧化损伤模型

1.2.1 原理：D-半乳糖供过于求，超常产生活性氧，打破遗传模型控制的活性氧产生和消除平衡，引起过氧化作用。

1.2.2 造模方法：选取健康成年小鼠25-30g。除空白对照组外，其余动物颈背皮下或腹腔注射D-半乳糖40mg-1.2g/kg BW。用量0.1mL/10g，每日1次，连续造模6周，测血MDA含量，按MDA水平分组。随机分为1个模型对照组和3个试验样品剂量组。 3个剂量组口服不同浓度的试验样品，模型对照组给予相同体积的溶剂。对照组和各剂量组继续在颈后皮下或腹腔内注射相同剂量的D-半乳糖。实验结束时处死动物，测定脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原型谷胱甘肽含量、抗氧化酶活性。

1.3 乙醇氧化损伤模型

1.3.1 原理：摄入大量乙醇，激活氧分子产生自由基，导致组织细胞发生过氧化作用，体内还原型谷胱甘肽耗竭。

1.3.2 造模方法：选取25-30g健康成年小鼠（180-220g大鼠）随机分为4组，1个模型对照组和3个试验样品剂量组，必要时可加空白对照组。 3个剂量组给予不同浓度的试验样品，模型对照组给予相同体积的溶剂30天。进食16小时（过夜）后，50%乙醇12ml/kg BW灌胃一次，6小时后取样（空白对照组不做处理，空腹取样），测定血清或肝组织中脂质氧化产物和蛋白质的含量。羰基含量、还原型谷胱甘肽含量、抗氧化酶活性。

2 实验原理

2.1 动物实验和人体食品试验所列指标均为强制性项目。

2.2 脂质氧化产物指标中可选用丙二醛和血清8-表氢异前列腺素测定，动物实验抗氧化酶指标中的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶可选用氧化酶进行指标测定。

2.3 选择氧化损伤模型动物和老年动物之一进行生化指标测定。

3 动物试验结果的确定

若化学制品、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质四项指标中三项为阳性，则可判定供试品抗氧化功能动物试验结果为阳性。